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詳細講解:葉綠素的定量測定實驗
點擊次數：272 發布時間：2018/8/24 15:10:32
實驗方法原理:
根據葉綠素對可見光的吸收光譜，利用分光光度計在某一特定波長下測定其光密度，而后用公式計算出葉綠素含量，此法精確度高，且能在未經分離的情況下分別測出葉綠素a、b的含量。
根據朗伯－比爾定律，某有色溶液的光密度D與其濃度C及液層厚度L成正比，即：
根據葉綠素對可見光的吸收光譜，利用分光光度計在某一特定波長下測定其光密度，而后用公式計算出葉綠素含量，此法精確度高，且能在未經分離的情況下分別測出葉綠素a、b的含量。
根據朗伯－比爾定律，某有色溶液的光密度D與其濃度C及液層厚度L成正比，即：
D＝kCL
式中k為比例常數，當溶液濃度以重量百分濃度為單位，液層厚度為 1 厘米時，k稱為該物質的比吸收系數。
如果溶液中有數種吸光物質，則此溶液在某一波長下的總光密度等于各組分在相應波長下光密度的總和，這就是光密度的加和性。
葉綠素a、b在紅光區的吸收峰分別位于663 nm 和 645 nm，在波長663 nm 下，葉綠素a、b的80％丙酮溶液的比吸收系數分別為82.04和9.27，在波長645nm下分別為16.75和45.6，可據此列出下列關系式：
式中的D663和D645為葉綠素溶液在波長663nm和645nm時的消光度，Ca和Cb分別為葉綠素a和b的濃度，以毫克/升為單位。
將Ca與Cb相加，即得葉綠素總量CT。
實驗儀器耗材: 新鮮葉片 丙酮 研缽 漏斗 天平 剪刀 燒杯 濾紙 量筒 分光光度計
實驗步驟:
稱取新鮮葉片0.5克，剪碎置研缽中，加少量碳酸鈣和石英砂，并加入2-3 ml 80％丙酮，研成勻漿，再加入10 ml 80％丙酮，繼續研磨充分，用一層加丙酮濕潤過的濾紙過濾，再用少量丙酮將濾紙和研缽上的色素沖洗干凈，定容至25 ml 容量瓶中，搖勻。
吸取葉綠素丙酮提取液2 ml ，加80%丙酮2 ml 稀釋后，倒入1 cm 比色杯中，用分光光度計分別在波長645nm、663nm和652nm下測定光密度，以80％丙酮為空白對照。
按公式（3）、（4）、（6）分別計算葉綠素a、b濃度及總濃度（毫克/升）
按下式計算葉綠素在葉片中的含量：
實驗步驟:
稱取新鮮葉片0.5克，剪碎置研缽中，加少量碳酸鈣和石英砂，并加入2-3 ml 80％丙酮，研成勻漿，再加入10 ml 80％丙酮，繼續研磨充分，用一層加丙酮濕潤過的濾紙過濾，再用少量丙酮將濾紙和研缽上的色素沖洗干凈，定容至25 ml 容量瓶中，搖勻。
吸取葉綠素丙酮提取液2 ml ，加80%丙酮2 ml 稀釋后，倒入1 cm 比色杯中，用分光光度計分別在波長645nm、663nm和652nm下測定光密度，以80％丙酮為空白對照。
按公式（3）、（4）、（6）分別計算葉綠素a、b濃度及總濃度（毫克/升）
按下式計算葉綠素在葉片中的含量：
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
