艾美捷Advanced Targeting Systems /ATSbio Fab pHast小鼠可在1天內對小鼠主要抗體的特異性、結合性和內在化進行定量測試。該二綴合物用于評估一抗體內化的潛力。制作1.5毫升“Fab pHast加標溶液”將使用約43微克Fab pHast。這是假設500 nM的加標溶液，并在96孔板上進行測定，這是方案中的建議量。這足以在8種不同濃度的抗體下測試六份（6個數據點）的1種抗體。

圖2：Fab pHast小鼠與192-IgG:HEK-293細胞，用p75神經營養素轉染在96孔板中以20000個細胞/孔接種受體并允許其粘附過夜。10 nM的192 IgG抗體（Cat.#AB-N43）在室溫下孵育圖1：Fab pHast小鼠的pH響應：熒光（RFU）為顯示為Fab pHast小鼠（Cat.pH-02). 酸性越強熒光，而堿性pH幾乎沒有熒光。將1µl或0.9µg添加到99µl 50mM中底部讀數為96的不同pH值的磷酸鉀-井板。在平板混合器上輕輕混合平板5分鐘，并在Spectra Max上讀取雙子座EM（Ex:532nm/EM:560nm）。

溫度與30nM Fab pHast小鼠（Cat.#PH-02）持續20分鐘。Fab pHast結合抗體為然后加入細胞中，在平板上輕輕混合2分鐘攪拌機。將細胞孵育過夜內部化，盡管可以檢測到內部化幾小時內。用PBS代替培養基更高的靈敏度，然后對細胞進行分析使用Y3放大20倍的熒光顯微鏡徠卡濾鏡立方體。

艾美捷Advanced Targeting Systems/ATSbio Fab pHast小鼠特異性和制備：

該二綴合物識別小鼠抗體。Fab pHast是山羊抗鼠單價抗體和pH依賴性熒光報告物的化學偶聯物。用于制造Fab pHast的抗體小鼠是針對小鼠IgG重鏈和輕鏈的親和純化的多克隆抗體。這個本品中使用的抗體將在免疫球蛋白類及其亞類之間發生交叉反應因為它們共享相同的輕鏈（kappa或lambda）。pHast熒光染料具有激發波長532nm，發射大值為560nm。

使用和儲存：

Fab pHast小鼠產生對您的初細胞的特異性、結合性和內在化的定量測試小鼠抗體，結果在1天內。該次共軛物用于評估初抗體內化。材料可能有很多不同；工作稀釋度必須由終用戶確定。如果是一個新的批次，您必須在開始完整的實驗方案之評估適當的工作稀釋度。使用輕輕旋轉材料；5-10的縮微膠片就足夠了。材料應為儲存于2-6°C，避光。您可以添加穩定劑，如BSA（1-10 mg/ml）或甘油穩定性和/或防腐劑如疊氮化鈉（2mM）。在這些條件下，材料具有穩定的保質期。

Advanced Targeting Systems(ATSbio)主要研究域包含神經靶向毒素，神經生物學研究方面的抗體/蛋白，靶向劑內化水平檢測工具等。艾美捷科技是ATSbio的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Advanced-Targeting-Systems.shtml