1.用純化的待測物質抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入待測物質；
2.與HRP標記的待測物質抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色；
3.TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關；
4.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中待測物質濃度。

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