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5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒實驗時應注意的事項
標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性 HRP,也會產生假陽性反應。保存過久可發生聚合在 ELISA 中可使本底加深。凍結標本融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩;鞚峄蛴谐恋淼臉吮緫入x心或過濾,澄清后再檢測。
反復凍融會使蛋白效價降低,所以待測標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。也可加入適當防腐劑。每個標本量收集體積= 100ul × 檢測種類,如要做復孔,標本量收集體積= 100ul × 檢測種類×2 。
對于作某一個具體指標來說,先用一系列稀釋度作一批標本測定,得出對實驗有意義的一個稀釋度(即測定劑量反應曲線),然后用一個*適稀釋度測定即可。
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃ 備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復凍融。標本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時, -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度
可保存 6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。
血清標本采集時,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以 HRP 為標記的 ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
原創作者:獨伊生物科技(上海)有限公司